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黄曲霉毒素免疫亲和柱

简介

　　AFT免疫亲和柱适用于基质复杂、低的样品中黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2检测的净化。可以进行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA的定量分析，适用于谷物，食品，饲料等的样品净化过程。

　　柱容量 约200ng 黄曲霉毒素

　　储存条件 2-8℃冷藏保存，不可冷冻

　　1 用途

　　用于实验室净化样品提取物以进行进一步分析

　　2 概要

　　黄曲霉毒素是谷类及其他农作物常见的霉变菌，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物。污染粮食、油料作物的种子，其中以花生、玉米易被污染，另外在小麦、高粱、巴西坚果、豆类和大米等重要粮食中也经常被检出。

　　黄曲霉毒素热稳定性很高，一旦产生便难以除去。对动物、植物和微生物具有很强的毒性，致癌力强，还能引起突变和导致畸形。

　　黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因之一，也是胃癌，肠癌等疾病的主要原因，对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品，饲料中的黄曲霉毒素都有严格的标准。

　　3 原理

　　测定的基础是抗原抗体反应，免疫亲和柱中含有和黄曲霉毒素抗体结合在一起的凝胶，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内黄曲霉毒素与抗体结合，其他的无关物质不会结合而直接通过免疫亲和柱，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。后加入甲醇将黄曲霉毒素释放，然后注入到分析仪器中进行进一步的检测。

　　4 提供的试剂

　　l 25支/盒免疫亲和柱，规格：1ml/3ml

　　5 操作者应注意事项

　　l 黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。

　　l 使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液宜用5%浓度的次氯酸钠溶液浸泡过夜。

　　l 不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

　　l 亲和柱于2-8℃冷藏保存，不可冷冻

　　l 使用前，免疫亲和层析柱需回至室温(22~25℃)

　　6 操作流程(符合GB/T 18979-2003国标方法)

　　l 粉碎好的样品过20目筛并在取样前混合，不立即分析的样品应放在冰箱中储存。

　　l 称取20g粉碎样品及4g氯化钠，加入100ml 70%甲醇/水。

　　l 高速均质约2分钟，或震荡器震荡约30分钟，

　　l 过滤样品至少10ml。

　　l 取10ml滤液加入20ml水，混合。

　　l 用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取15ml准备加入到免疫亲和柱中过柱。

　　l 将10ml注射器连接于免疫亲和柱上端。

　　l 处理好的样品液15ml以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。

　　l 加10ml水淋洗柱子两次，弃掉流出的液体，

　　l 利用真空设备压入空气或用注射器吹干柱子中的水。

　　l 加入1ml甲醇缓慢洗脱，流速约为2-3秒每滴。

　　l 收集全部洗脱液于干净的比色皿或其他容器中用于检测。

　　7 操作流程图

　　8 液相色谱测定条件

　　● 激发/发射波长：360nm/440nm

　　● 流动相：甲醇-水(45+55)

　　● 流速：0.8mL/min

　　● 进样量：20ul

　　● 柱温：30°C

　　● 反应时间：10min

　　用进样器吸取20µL黄曲霉毒素标准工作液注入HPLC

　　色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响

　　应值(峰高或峰面积)，得到黄曲霉毒素B1、B2、

　　G1、G2标准溶液HPLC色谱图

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