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　　Hygromycin B 潮霉素B 1g 10g 50g

产品信息

产品描述

  潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。

 大肠杆菌（ Escherichia coli.）来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418 (Geneticin^TM)，Zeocin和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

产品性质

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃干燥保存，有效期2年。

注意事项

1. 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了来自E. Coli.之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3.本产品仅作科研用途！

使用方法

1. 储存液的配制（50 mg/mL）

称取0.5 g 潮霉素B加入10 mL 1×PBS，PH 7.4，充分溶解后用0.22 μm滤器过滤除菌，分装成单次使用的小量（如1 mL）放到-20℃冻存，1年稳定。

2. 常用筛选浓度

潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000 μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞：50-500 μg/mL；细菌/植物细胞：20-200 μg/mL；真菌：300-1000μg/mL。

3. 杀灭曲线的建立

【注意事项】：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线来实现，建议至少选择5个浓度。

1）第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜。
【注】：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。

2）根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/mL，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

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