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产品信息
产品名称
产品编号
规格
Probe qPCR Mix hUDG热启动探针法定量PCR Mix(含抗体修饰热启动酶+hUDG)
HRF0071
100T
产品描述
HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG 是一款适用于DNA模板(如DNA病毒)的探针法qPCR DNA 聚合酶,以其的定量性被广泛应用,并能有效的防止污染,核心组分Taq HS DNA Polymerase是基于抗体法修饰,经过升级改造提升模板亲和能力的新一代热启动DNA聚合酶。
产品组分
Mix 组分
(100T)
5×qPCR Buffer
1000 μL
Probe qPCR Mix hUDG
120 μL
a、内含dUTP 及含镁离子 buffer.
b、内含 AB-HS Taq DNA polymerase
运输与保存方法
-20 ℃,保质期1年。
产品特点
1、qPCR反应;
2、高特异性和高灵敏度。
体系配制(以50μL反应体系为例)
组分
体积
10 μL
上游引物(20μM)
0.5μL(variable)
下游引物(20μM)
探针(20μM)
0.25μL(variable)
DNA 模板
30 μL(variable)
Probe AB-HS qPCR Mix
1.2 μL
volume
to 50 μL
注: 1、引物一般在 0.1μM-1μM 之间进行调整,一般情况下引物浓度在 0.2μM可达到理想的检测效果;
2、探针浓度一般在 50nM-250nM 质检进行调整;
3、扩增片段的长度一般在 80bp-150bp 之间。
反应条件
步骤
温度
时间
循环数
检测荧光
25℃
5min
1
Off
预变性
95℃
3min
变性
15s
45
退火
60℃
30s
On
注:1、预变性时间设置:由于本试剂用到的是抗体修饰酶,需要热激活处理,一般建议预变性时间设为 95℃,3min。
退火温度和时间设置:请根据引物的 Tm 值和目的基因的长度进行调整。
结果分析
1.扩增结束无扩增曲线
1)建议加入高浓度和高质量的 DNA 模板确保反转的成功;
2)引物是否降解,可以通过PAGE 胶确定其完整性;
3)反应循环数不够,一般将循环数设为 40-45 个循环;
4)确认PCR 程序设置中是否设置了荧光采集过程。
2.CT 值出现过晚
1)反应条件不够优化,可适当降低退火温度;
2)模板浓度过低或加样量不足;
3)PCR 产物过长,一般PCR 产物推荐长度为 80-150bp。
3.阴性对照有明显扩增
1)Mix 液、ddH2O、引物和探针可能存在污染,更换新的重新进行实验。
Probe qPCR Mix hUDG热启动探针法定量PCR Mix 注意事项
本产品仅供科研用途!
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