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产品信息
产品名称
产品编号
规格
HRbio™ miRNA RT-qPCR Detection Kit
HRbio™ miRNA开云体育手机版入口荧光定量PCR检测试剂盒
HRF0721
25次开云体育手机版入口+500次qPCR反应
产品描述
本产品HRbio™ miRNA RT-qPCR Detection Kit包含miRNA检测的全部试剂。本制品采用Poly(A)加尾法,以miRNA为模板,采用特殊优化预混合miRNA RT Enzyme mix(包含 Poly(A)加尾酶和开云体育手机版入口酶)将 Poly(A)加尾和开云体育手机版入口一步法高效完成cDNA 合成;miRNA检测使用 2×miRNA qPCR Mix。适用于Total RNA或者small RNA等包含 miRNA 的样品。
产品特点
1. Poly(A)加尾酶和反转录酶配比及优化的反应buffer,确保miRNA 的开云体育手机版入口效率。
2.PolyA 加尾和开云体育手机版入口cDNA合成在同一管内一步法完成。
3.2×miRNA qPCR Mix 扩增效率高,特异性强和灵敏度高。
4.配套ROX Reference Dye,可以用于各种需要高低 ROX 参比染料的机型。
产品组分
编号
组分
HRF0721(25T)
HRF072-A
miRNA RT Enzyme Mix
50 μL
HRF072-B
2×miRT Reaction Mix
250 μL
HRF072-C
Reverse primer(10μM )
200 μL
HRF072-D
2 ×miRNAqPCR Mix(With SYBR Green)
5mL
HRF072-E
ROX Reference Dye
100 μL
HRF072-F
RNase free H2O
1 mL
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存,避免反复冻融,有效期1年。
使用方法
一、miRNA 3’末端进行Poly (A)加尾和开云体育手机版入口反应(链合成)
1.解冻2×miRNA RT Reaction Mix并混匀,miRT Enzyme Mix放于冰中备用,加入以下试剂至总体积20μl(注意:最后加入miRNA RT Enzyme Mix)
Total RNA (见注意事项)
x μL
Up to 2μg
2 ×miRNA RT Reaction Mix
10 μL
1×
2 μL(见注意事项)
-
加RNase free H2O补足到
2.移液器轻轻混匀上述配制的反应液,短暂离心后在42°C反应60 min。
3.85°C加热5秒钟失活miRNA RT Enzyme Mix。
4.合成的cDNA反应液可放置于-20°C保存;也可以直接进行下游PCR或者荧光定量PCR检测。
注意事项
1.miRNA RT Enzyme Mix比较粘稠,溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请点甩离心,并且避免吸头外壁沾附损失。Enzyme Mix内酶都是过量的,即使每次按照 1.8μl使用,也不影响使用效果。
2.在反应中使用的total RNA 必须包含有小分子RNA(miRNA)。此过程也可以使用富集的miRNA, 单纯miRNA无法直接用分光光度计定量,建议直接加入2μl ~5μl。可根据目的miRNA丰度决定加入量,但是对于低丰度miRNA 样品而言(如血清血浆提取物),可直接加入体积8 μl。
3.按照上述操作步骤得到的cDNA模板用于下游PCR或者荧光定量PCR检测时,可以根据实际情况选择使用量,对于特殊的检测体系中,高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增,可根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA(5-10倍或者100倍)后使用。如果发现有非特异扩增条带,或者溶解曲线显示有非特异扩增,往往提示cDNA模板过量, 可以尝试将上述cDNA模板稀释几十到几百倍甚至上千倍再使用。miRNA开云体育手机版入口荧光定量PCR检测试剂盒
4、本产品仅作科研用途!
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