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PCR系列
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产品信息
产品名称
产品编号
规格
Profusion™ DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶
HRF0085
100 U
HRF0086
500 U
HRF0087
1000 U
产品描述
Profusion™ DNA Polymerase 是一款超高保真 DNA 聚合酶,其采用蛋白融合技术且具有通用引物退火功能。它是一款融合到持续合成能力增强域的火球菌属样校正 DNA 聚合酶,使 Profusion™ DNA 聚合酶产生具有高准确度、灵敏度和抑制剂耐受性的 PCR 序列。 该酶具有 5’→3’DNA 聚合酶活性和 3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是 Taq DNA 聚合酶的 100倍。 酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增速度达到 15-30sec/kb ,扩增目的片段的长度可长达 20 kb。本产品配备了优化缓冲液,添加了 PCR 增强组分,使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
组分名称
(100 U)
(500 U)
(1000 U)
Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL)
50 μL
250 μL
250 μL×2
2×Profusion™ PCR buffer (含 Mg2+ )
1 mL×3
1 mL×15
1 mL×30
10mM dNTP
100 μL
500 μL
1000 μL
6×DNA loading buffer
1 mL
1 mL×5
1 mL×10
产品应用
1.高保真 PCR
2.基因克隆
3.生成测序模板
4.高 GC 含量 PCR
5.长片段 PCR(长达 20 kb)
6.突变
7.高通量 PCR
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子 DNA 为模板/引物, 74℃ ,30 min 内,摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 U。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。
DNA Polymerase 超高保真DNA聚合酶
推荐PCR反应体系(冰盒上配制)
组分
体积(μL)
终浓度
ddH2O
to 50 μL
-
25 μL
1×
1uL
0.2mM
DNA 模板
适量
Primer 正向 (10 μM)
2.5 μL
0.5 μM
Primer 反向 (10 μM)
Profusion™ DNA Polymerase (2 U/μL)
0.5 μL
1 U/50 μL
【注】
1)试剂使用:使用前请充分融解和混匀。
2)聚合酶浓度:推荐使用 1 U/50 μL,可以在 0.5-2 U/50 μL 之间进行优化,不要超过2 U/50 μL。
3)聚合酶添加:高保真酶有 3’→5’外切酶活性,可能会降解引物,配制反应体系时,酶应该在最后添加。
4)Mg2+终浓度: 体系终浓度为 1.5 mM。如有特殊需要,可用 50 mM MgCl2,以 0.2-0.5 mM 为间隔向上摸索。
5)高 GC 模板: 高GC含量的片段扩增时,体系中加入终浓度为 3%的 DMSO 有利于扩增,可明显的提高扩增的效率。
不同模板的推荐使用量(50 μL 反应体系):
模板种类
扩增片段1kb-10kb
基因组 DNA
50 ng-250 ng
质粒或病毒 DNA
1pg-10 ng
cDNA
1-5 μL (不超过 PCR 反应总体积的10%)
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