SDS-PAGE凝胶电泳的操作步骤

　　SDS-PAGE凝胶电泳的操作步骤

　　SDS-PAGE凝胶电泳是一种广泛用于蛋白质分离和分析的技术，以下是天正信达技术小编对其详细操作步骤：

　　1. ‌样品制备‌

　　裂解‌：使用裂解缓冲液将细胞或组织裂解，释放蛋白质‌。

　　变性‌：加入SDS和还原剂(如β-巯基乙醇或DTT)，使蛋白质变性并带上负电荷‌。

　　煮沸‌：将样品在95°C加热5-10分钟，确保蛋白质变性‌。

　　2. ‌凝胶制备‌

　　分离胶‌：根据蛋白质分子量范围，配制适当浓度的分离胶(如10-15%)。将分离胶溶液灌入玻璃板之间，用水或异丙醇覆盖顶部，待其凝固‌。

　　浓缩胶‌：配制浓缩胶(如4%)，灌入分离胶上方，插入梳子，待其凝固后形成样品孔‌。

　　3. ‌电泳槽准备‌

　　组装‌：将制备好的凝胶放入电泳槽，确保玻璃板正确对齐‌。

　　加缓冲液‌：加入电极缓冲液，确保内外槽液面齐平‌。

　　4. ‌加样‌

　　样品上样‌：将变性后的样品与上样缓冲液混合，用微量移液器小心加入凝胶孔中‌。

　　Marker‌：在同一凝胶中加入蛋白Marker，作为分子量标准‌。

　　5. ‌电泳‌

　　连接电源‌：将电泳槽与电源连接，初始电压设置为80V，待样品进入分离胶后调整为150V‌。

　　电泳‌：在电场作用下，蛋白质根据分子量大小在凝胶中分离‌。

　　6. ‌染色与脱色‌

　　固定‌：电泳结束后，将凝胶从玻璃板上剥离，放入固定液中‌。

　　染色‌：使用考马斯亮蓝等染料对蛋白质进行染色‌。

　　脱色‌：去除背景染色，使蛋白质条带清晰可见‌。

　　7. ‌成像与分析‌

　　成像‌：使用凝胶成像系统对染色后的凝胶进行成像‌。

　　分析‌：根据蛋白质条带的位置和强度，分析目标蛋白的分子量和表达水平‌。

　　以上步骤涵盖了SDS-PAGE凝胶电泳的主要操作流程，确保实验的准确性和可重复性‌。

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