产品速递：RNA开云体育手机版入口试剂盒说明书

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　　RNA开云体育手机版入口试剂盒说明书

　　RNA开云体育手机版入口试剂盒用于将RNA模板反转录为cDNA，适用于RT-PCR、Real-Time PCR等实验。以下是主要内容和操作指南：

　　1. ‌产品概述‌

　　HiScript III 1st Strand cDNA Synthesis Kit‌：包含新一代开云体育手机版入口酶HiScript III Reverse Transcriptase和优化的Buffer，提高一链合成效率。5 × gDNA wiper Mix可在42℃下2分钟快速去除基因组DNA‌。

　　PrimeScript RT reagent Kit‌：使用PrimeScript RTase从Total RNA或PolyA+ RNA合成cDNA，适用于长片段(12kb)和复杂二级结构的RNA‌。

　　2. ‌试剂盒组成‌

　　HiScript III Kit‌：包含HiScript III Reverse Transcriptase、5 × gDNA wiper Mix、dNTP Mix等‌。

　　PrimeScript Kit‌：包含PrimeScript RTase、5× PrimeScript Buffer、RNase Inhibitor、dNTP Mixture、Oligo dT Primer、Random 6mers等‌。

　　3. ‌操作步骤‌

　　RNA模板准备‌：建议使用10ng至5μg总RNA或1至100ng mRNA，低浓度RNA可加入MS2 RNA处理‌。

　　反应体系配制‌：按说明书比例混合RNA模板、引物、dNTP、Buffer和开云体育手机版入口酶‌。

　　开云体育手机版入口反应‌：42℃反应60分钟，95℃加热5分钟灭活酶‌。

　　cDNA保存‌：产物可短期保存于-20℃，长期保存于-80℃‌。

　　4. ‌注意事项‌

　　引物选择‌：建议使用六聚寡核苷酸引物和Oligo(dT)18组合，保证产量和灵敏度‌。

　　反应条件‌：避免高温反转录，防止RNA降解‌。

　　cDNA使用‌：建议在Real-Time PCR中使用5% cDNA模板，浓度过高需稀释，过低需加倍‌。

　　5. ‌应用场景‌

　　RT-PCR‌：用于基因表达分析、cDNA克隆等‌。

　　Real-Time PCR‌：适用于定量分析RNA表达水平‌。

　　6. ‌常见问题‌

　　cDNA质量验证‌：建议通过Real-Time PCR验证内参基因‌。

　　非特异性扩增‌：使用Hot Start型DNA聚合酶抑制非特异性扩增‌。

　　以上内容综合了HiScript III和PrimeScript试剂盒的说明书，适用于实验室RNA开云体育手机版入口操作‌。

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