EndoFree Plasmid Maxi Kit 无内毒素质粒大量提取试剂盒
产品信息 产品名称 产品编号 规格 EndoFree Plasmid Maxi Kit 无内毒素质粒大量提取试剂盒 HRN0031 10 次 产品描述 本试剂盒采用改进 SDS-碱裂解法裂解细胞 ，粗提物通过采用高效的去内毒素系统除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低 pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA，再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅基质膜上洗脱。每次可处理 100-200 ml 细菌培养液 ，理论上最多可提取 2mg 质粒 DNA 产品组分 试 剂 盒 组 成 保存 10 次 RNaseA（ 10mg/mL） 4℃ 1mL Buffer I 4℃ 120mL Buffer II 室温 120mL Buffer III 室温 120 mL Buffer PI 室温 100mL Buffer ER 室温 30mL Buffer PB 室温 120mL Buffer PW 室温 72mL 第一次使用前请加入 168mL 无水乙醇 Buffer PE 室温 50mL Buffer TE 室温 30mL 针筒内毒素过滤器 室温 10 个 吸附柱和离心管（ 50mL） 室温 10 个 产品特点 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用高品质特制吸附膜 ，柱与柱之间吸附量差异极小 ，可重复性好。 2.不需要使用有毒的苯酚 ，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速 ， 方便，从 100-200 mL 大肠杆菌 LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取 0.5-2mg 纯净的高拷贝质粒 DNA，提取率达 80-90 %。 3.本试剂盒提取的质粒 DNA ， 内毒素含量极低（ <0.1 EU/ μg DNA） ，细胞转染效果佳。也可直接用于酶切、转化、 PCR、体外转录、测序、等各种分子生物学实验。 运输和保存方法 1）本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
2）第一次使用时，将试剂盒所带全部的 RNase A 加入 Buffer I 后（终浓度 100ug/mL）置于 4℃保存。如果 Buffer I 中 RNase A 失活 ，提取的质粒可能会混杂有微量 RNA 残留 ，在 Buffer I中补加 RNase A 即可。(使用前，用多少取多少，放置27°C孵化5~10min) 3）环境温度低时 Buffer II 中 SDS 可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清 ，不要剧烈摇晃 ，以免形成过量的泡沫。 4）避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、 pH 值变化 ，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 注意事项 1.所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成，使用转速可以达到 12,000 x g，带 50 mL 转头的台式离心机。 2.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb的大质粒 ，应加大菌体使用量 ， 同时按比例增加 Buffer I、 Buffer II、 Buffer III 的用量 ，洗脱缓冲液应在 70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间 ，以增加提取效率。 3.得到的质粒 DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 值为 1 相当于大约 50μg/mL DNA。 电泳可能为单一条带 ，也可能为 2 条或者多条 DNA 条带 ，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。 本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过 90%。 4.质粒 DNA 确切分子大小 ， 必须酶切线性化后 ，对比 DNA 分子量 Marker 才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒 ，泳动位置不确定 ，无法通过电泳知道其确切大小。 5.洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH 大于 7.5 ， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 ，质粒应该保存在－20℃ 。质粒 DNA 如果需要长期保存 ，可以用 TE 缓冲液洗脱（ 10mM Tris-HCl ， 1mM EDTA ，pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应 ，使用时可以适当稀释。 使用方法 提示： →第一次使用前请先在 Buffer PW 中加入 84 mL 无水乙醇 ，充分混匀 ，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇 ，以免多次加入! →将 RNase A 加入 Buffer I 中 ，混匀 ，每次使用后置于 2-8℃保存。 1、取 100 ml-150ml（低拷贝 200 ml-250ml）过夜培养的菌液加入离心管 ， 8,000 rpm 离心3 min 收集细菌 ，弃上清。 2、加入 10 ml Buffer I（请先检查是否已加入 RNase A） ，使用移液器或涡旋振荡器悬浮沉淀。 3、加入 10 ml Buffer II ，立即温和地上下翻转 6-8 次（不要剧烈震荡） ，使菌体充分裂解 ，室温放置 5 min。 4、向离心管中加入 10 ml Buffer III，立即温和地上下翻转 6-8 次（溶液加完后应立即上下翻转，以避免产生局部沉淀） ，充分混匀 ，至溶液出现白色、分散絮状沉淀。室温放置 10 min 后 ，再8,000 rpm 离心 10 min。 5、将步骤 4 的离心上清全部溶液转移至内毒素吸附过滤柱中（请避免倒入大量沉淀 ，以免阻塞过滤器） ，缓慢推动推柄过滤 ，滤液收集在干净的 50 mL 的管中。 6、 向滤液中加入 0.3 倍滤液体积的 Buffer PI ，0.1 倍滤液体积的 Buffer ER ，上下颠倒混匀后转移到吸附柱中（吸附柱放入 50 ml 收集管中）。 注意： 吸附柱的最大容积为 20 ml ，所以需要分多次过柱。个别情况下离心机转子倾角较大 ，此 时 ，建议加入吸附柱的溶液体积不超过 15 ml ，以防产生漏液现象。 7、 8,000 rpm 离心 2 min ，倒掉收集管中的废液 ，将吸附柱重新放回收集管中。 8、 向吸附柱中加入 10mL 去蛋白液 Buffer PB ，8,000 rpm 离心 2 min。 9、 向吸附柱中加入 10 ml Buffer PW ，8,000 rpm 离心 2 min ，弃废液 ，将吸附柱重新放回 收集管中。 10、重复操作步骤 9。 11、 向吸附柱中加入 3 ml Buffer PE ，室温 8,000 rpm 离心 2 min ，弃废液。 12、将吸附柱重新放回收集管中 ，8,000 rpm 离心 5 min ，以去除残余的漂洗液。 13、打开吸附柱盖子 ，置于室温放置数分钟 ，以晾干吸附材料中残余的漂洗液。 14、将吸附柱置于干净的 50 ml 收集管中 ， 向吸附膜的中间部位悬空滴加 1-2 ml Buffer TE ，室温放置 2 min ，然后 8,000 rpm 离心 2 min。将离心下来的质粒 DNA 全部移入到干净的1.5 ml 离心管 ， -20℃保存。 天津天正信达供应：RNA开云体育手机版入口试剂盒、开云体育手机版入口试剂盒、PCR试剂盒 、提取试剂盒、色谱进样瓶、培养基瓶、试剂瓶、胎牛血清、染色液、试剂瓶、QPCR试剂盒、生物试剂、抗体、琼脂糖、实验耗材，我司拥有一支覆盖生物化学、分子生物学、免疫学等专业人员的研发、构建了仪器设备齐全的实验技术平台，主要包括AKTA、高压均质机、全波长酶标仪、高速落地离心机和qPCR仪等大型仪器设备。 | 
